分光光度计，又称光谱仪(spectrometer)，是将成分复杂的光，分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200～380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的380～780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源。 分光光度计作为一种精密仪器，在运行工作过程中由于工作环境，操作方法等种种原因，其技术状况必然会发生某些变化，可能影响设备的性能，甚至诱发设备故障及事故。因此，分析工作者必须了解分光光度计的基本原理和使用说明，并能及时发现和排除这些隐患，对已产生的故障及时维修才能保证仪器设备的正常运行。 1)若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。 2)指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。 3)比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。 4)操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。 5)1900型等分光光度计，由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。 6)放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。 7)比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用，否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。具体方法如下;分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处，石英比色杯;220nm、700nm装蒸馏水，玻璃比色杯：700nm处装蒸馏水，将某一个池的透射比值调至100%，测量其他各池的透射比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。 分光光度计分操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法： 1)仪器不能调零。可能原因： a)光门不能完全关闭。解决方法：修复光门部件，使其完全关闭。 b)透过率“100%”旋到底了。解决方法：重新调整“100%”旋钮。 c)仪器严重受潮。解决方法：可打开光电管暗盒，用电吹风吹上一会儿使其干燥，并更换干燥剂。 d)电路故障。解决方法：送修理部门，检修电路。 2)仪器不能调“100%”。可能原因： a)光能量不够。解决方法：增加灵敏度倍率档位，或更换光源灯(尽管灯还亮)。 b)比色皿架未落位。解决方法：调整比色皿架使其落位。 c)光电转换部分老化。解决方法：更换部件。 d)电路故障。解决方法：调修电路。 3) 测量过程中,“100%”点经常变动。可能原因： a)比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解决方法：用擦镜纸擦干净比色皿表面，然后将其安放在比色槽的左边，上面用定位夹定位。 b)电路故障(电压、光电接收、放大电路)。解决方法：送修。 4)数显不稳。可能原因： a)预热时间不够。解决方法：延长预热时间至30分钟左右(部分仪器由于老化等原因，长时间处于工作状态时，也会工作不稳)。 b)光电管内的干燥剂失效，使微电流放大器受潮。解决方法：烘烤电路，并更换或烘烤干燥剂。 c)环境振动过大、光源附近空气流速大、外界强光照射等。解决方法：改善工作环境。 d)光电管、电路等其它原因。解决方法：送修。 五、提高分光光度计透射比检定及使用精度的几种方法 在分光光度计的使用或检定中,透射比(吸光度)的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。所以提高此项指标的使用及检定准确度显得尤为重要。